基于CaseViewer软件，这是一根小鼠的股骨——

因为绿色和黄色重合度有点高，所以我暂时把黄色的荧光通道调成了蓝色的。

因为带比例尺，所以这一步我们可以顺便评估细胞的大小，大概是10微米左右~

选中自己想要的视野，然后导出为tif格式的图片便于后续分析。

我们接下来就要用CD11B|LY6G|CXCR2来定位并计数骨髓中成熟的中性粒细胞：

step 1  分割通道

然后就会变成3个窗口，每个窗口都分别是一个颜色。

接下来分别定位每个颜色通道下的阳性细胞，最后取三者的交集就可以得到CD11B+LY6G+CXCR2+的细胞啦~

这里的阈值设置需要根据自己的标准来

调好阈值以后，Edit➡Selection➡Create Selection 【不要点Apply！！！】

右键在红色区域，点击add to ROI后保存，按照颜色来重命名一下，接下来的几个通道也照葫芦画瓢。

step 2 merge

选中第一个通道，按住ctrl键，将所有通道都选中，再AND。这个时候会发现又多了一个和第一个通道名字相同的文件，直接重命名为merge即可。

鼠标到被黄色圈住的任意区域，右键，

会得到黑白的二值化图片

这基本就是三阳性的细胞了。

step 3 细胞计数

参数调节：

可以参照从CaseViewer中的细胞大小来设置Size，大概是10。其他的参数可以根据自己的细胞形状来调整。

点击OK就能得到细胞计数啦~