上次我们介绍了靶蛋白降解的策略（国自然思路|蛋白稳定性和降解，除了泛素化-蛋白酶体途径外，还有哪些？），今天来看一篇JCI期刊上的研究：Targeted degradation of oncogenic KRASG12V triggers antitumor immunity in lung cancer models靶向降解KRAS G12V触发肺癌模型中的抗肿瘤免疫反应：
非小细胞肺癌（NSCLC）是全球癌症死亡的主要原因之一，其中KRAS是肺腺癌中最常发生的致癌基因。KRAS是肺腺癌中最常发生的致癌基因，KRAS G12C和G12V是最主要的突变形式，直接针对KRAS一直是一个挑战，因为KRAS被认为是一个“不可成药”的靶点。尽管KRAS G12C突变体的靶向治疗取得了进展，但针对KRAS G12V的研究较少，缺乏特异性抑制剂。本研究利用降解标签（dTAG）系统，针对KRAS G12V进行靶向降解，并研究其对肿瘤微环境（TME）的影响。说明：降解标签（dTAG）系统是一种用于实现目标蛋白质快速、特异性降解的技术。这一系统通过小分子化合物（称为dTAG分子）来招募E3泛素连接酶，从而标记目标蛋白质进行泛素化，并最终通过蛋白酶体途径将其降解。dTAG系统的优势在于它能够快速、特异性地降低目标蛋白质水平，包括那些传统上难以降解的蛋白质。研究团队通过dTAG系统实现了KRAS G12V的特异性降解，并在小鼠模型中评估了其对肿瘤生长和TME的影响。研究发现，KRAS G12V的降解能够抑制肿瘤生长，改变TME，并激活抗肿瘤免疫反应，特别是增强了CD8+T细胞的活性；此外，通过单细胞RNA测序技术，研究揭示了KRAS G12V降解对免疫细胞亚群的影响，包括M1型巨噬细胞增加和M2型巨噬细胞减少，以及对B细胞亚群的影响。最后，通过体内中和抗体实验证实了KRAS G12V降解引发的抗肿瘤免疫反应部分依赖于CD8+T细胞。
为了探究KRAS G12V降解的机制和效果，研究团队使用dTAG系统诱导FKBP12F36V-KRASG12V融合蛋白降解的实验，检测了HA标签和下游信号通路的变化。发现dTAG分子能够特异性地降解FKBP12F36V-KRASG12V融合蛋白，并伴随下游pERK信号的显著下降，说明dTAG系统能够有效降解KRAS G12V并抑制其信号通路。为了评估KRAS G12V降解对肿瘤生长的影响，研究团队在FKBP12F36V-KRASG12V基因工程小鼠模型（GEMM）中进行dTAG治疗的实验，检测了肿瘤体积和生存率的变化。发现dTAG治疗显著减小了肿瘤体积并延长了小鼠的生存期，说明KRAS G12V的降解能够显著抑制肿瘤生长并提高生存率。第三部分：KRAS G12V降解对肿瘤微环境和免疫反应的影响为了探究KRAS G12V降解对肿瘤微环境（TME）和免疫反应的影响，研究团队开展了单细胞RNA测序和流式细胞术分析，检测了肿瘤浸润性免疫细胞的变化。发现KRAS G12V降解能够增加效应和细胞毒性CD8+T细胞的数量，促进M1型巨噬细胞的增加，减少M2型巨噬细胞，以及影响B细胞的不同亚型，说明KRAS G12V降解能够重编程TME，增强抗肿瘤免疫反应。
第四部分：KRAS G12V降解的抗肿瘤免疫依赖性为了确定KRAS G12V降解引发的抗肿瘤免疫反应是否依赖于特定的T细胞亚群，研究团队开展了体内中和抗体实验，检测了CD8+T细胞和CD4+T细胞对dTAG治疗效果的影响。发现耗竭CD8+T细胞能够显著降低dTAG治疗效果，而CD4+T细胞的耗竭没有显著影响，说明KRAS G12V降解引发的抗肿瘤免疫反应部分依赖于CD8+T细胞。
最后我们简单总结一下。
我们看到这篇文章从研究内容上并不复杂，但与我们平时自己做的课题相比还是有很多亮点，首先是临床问题的选择，KRAS突变是肺癌等肿瘤的常见突变，而临床用的靶向治疗的抑制剂针对的是G12C这个突变，而G12V的研究少很多，所以是未被满足的临床痛点；另外，药物开发一般比较常见的靶点特性是激酶（走抑制剂、激动剂这条路）、膜蛋白、分泌性蛋白（走抗体这条路）等，因此KRAS G12V的突变体还没有好办法，所以正好适用靶蛋白降解的这个策略，之前我们介绍过的PROTACs、AUTACs等。
所以研究团队就开发了KRAS G12V突变体的降解标签（dTAG）系统，然后就是对dTAG的评价：包括了对KRAS G12V突变体的蛋白降解、基因敲除小鼠模型GEMM等，既包括肿瘤大小、小鼠生存率的影响，也通过单细胞测序揭示dTAG对肿瘤微环境的影响（这里主要是巨噬细胞和CD8+T细胞），但是我们也看到并没有展示对体外细胞系的影响，最后研究发现dTAG抑制肿瘤的作用是需要CD8+T细胞的，为了证明这一点，他们通过中和抗体发现是部分依赖于CD8+T细胞的。
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