辛夷为木兰科植物望春花Magnolia biondii Pamp.、玉兰Magnolia denudata Desr. 或武当玉兰Magnolia sprengeri Pamp. 的干燥花蕾。辛夷性温、味辛，归肺、胃经，具有散风寒、通鼻窍的功效，用于治疗风寒头痛、鼻塞流涕、鼻鼽、鼻渊等症。细辛为马兜铃科植物北细辛Asarum heterotropoides Fr. Schmidt var. mandshuricum(Maxim.) Kitag.、汉城细辛Asarum sieboldii Miq. var.seoulense Nakai或华细辛Asarum sieboldii Miq. 的干燥根和根茎。
六经头痛片以细辛、辛夷、荆芥穗油等9味中药为处方，治疗全头痛、偏头痛[1]，其中细辛、辛夷药材是取其挥发油和水煎液共同入药，研究报道细辛水提液和挥发油均有较强的镇痛作用，对内脏疼痛的镇痛效果挥发油强于水煎液[2]。细辛善行能通，止痛之力较强，治六经中少阴头痛[3]；辛夷善宣通窍，助细辛解表之力，增强细辛止痛之功。早在《证治准绳》中细辛、辛夷配伍使用治疗鼻渊头痛、鼻内窒塞不通不得喘息，《本草纲目》中记载辛夷上行头目，可治疗风寒湿厥头痛[4]，现代临床中细辛则应用于肝经风热头痛等多种头痛[5]，本方中细辛温肺化饮、通窍止痛，作为全方少阴经引经用药，辛夷上达头目，通窍止痛。方中细辛、辛夷药材收载于《中国药典》2015年版[6]，查阅文献尚未有对六经头痛片中辛夷、细辛质量研究的报道，本实验建立了辛夷、细辛药材的GC指纹图谱，运用相似度评价软件进行分析，并对其全部共有峰进行指认，得辛夷共有峰中14个归属于六经头痛片全方成分，8个为药材本身的特有成分；细辛共有峰中归属至全方化合物为4个，7个为药材本身的特有成分。
1 仪器与材料
美国Agilent 7890B气相色谱仪（氢火焰检测器，FID）；DB-WAX气相色谱柱（20 m×0.18 mm，180 μm），美国Agilent公司；美国Agilent 7890A-5975C气-质联用系统；色谱专用空气发生器Air-Model-5 L，色谱专用氢气发生器HG-Model 300A，天津市色谱科学技术公司；高纯氮气（99.99%），天津东方气体有限公司；BT25S万分之一电子天平，德国Sartorius公司。
辛夷药材（批号Y901～Y910，Y1505206），产地河南，由天津隆顺榕发展制药有限公司提供。经天津药物研究院中药现代研究部张铁军研究员鉴定为木兰科植物望春花Magnolia biondii Pamp. 的干燥花蕾。对照品为桉叶油素（批号为110788-201506，质量分数98.4%）购自中国食品药品检定研究院。
细辛药材（批号Z901～Z910，Y1411470），产地辽宁，由天津隆顺榕发展制药有限公司提供，经天津药物研究院中药现代研究部张铁军研究员鉴定为马兜铃科植物北细辛Asarum heterotropoides Fr. Schmidt var. mandshuricum (Maxim.)Kitag. 的干燥根和根茎。对照品为甲基丁香酚（批号为111642-200301）购自中国药品生物制品检定所，质量分数大于98%。醋酸乙酯（色谱纯）购自天津市康科德科技有限公司，水为娃哈哈纯净水。
2 方法与结果
2.1 色谱及质谱条件
2.1.1 辛夷GC色谱条件 进样口温度250℃，检测器温度290 ℃，进样量5 μL，分流比50∶1；体积流量0.8 mL/min。程序升温条件：初温40 ℃（保持5min），以8 ℃/min的速度上升至100 ℃（保持2min），以1.5 ℃/min的速度上升至110 ℃（保持10min），以5 ℃/min的速度上升至230 ℃（保持6min）。
2.1.2 细辛GC色谱条件 色谱条件：进样口温度230 ℃，检测器温度290 ℃，进样量3 μL，分流比30∶1；体积流量1 mL/min。程序升温条件：初温50 ℃（保持5 min），以4 ℃/min的速度上升至120 ℃（保持2 min），以2 ℃/min的速度上升至145 ℃（保持8 min），以5 ℃/min的速度上升至230 ℃（保持6 min）。
2.1.3 质谱条件 EI电离源；电子能量70 eV；四极杆温度150 ℃；离子源温度230 ℃；倍增器电压1 412 V；溶剂延迟2.30 min；Scan扫描范围m/z 10～700。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取对照品桉叶油素适量，精密称定，加醋酸乙酯制成含3.648 mg/mL的溶液，摇匀，即得；取对照品甲基丁香酚适量，精密称定，加醋酸乙酯制成含8 mg/mL甲基丁香酚的溶液，摇匀，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 称取辛夷药材粗粉10 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加入30倍水，按照《中国药典》2015年版[6]挥发油检查项下方法加热回流提取挥发油，挥发油提取器液面上方精密加入2 mL醋酸乙酯，水蒸气蒸馏提取3 h，取醋酸乙酯层转移至5 mL量瓶中，用适量醋酸乙酯润洗挥发油提取器，一并转移至量瓶中，用醋酸乙酯稀释至刻度，混匀。取适量无水硫酸钠加入量瓶中脱水，过0.45 μm滤膜，即得。同法制备细辛供试品溶液。
2.3 方法学考察
2.3.1 精密度试验 取批号为Y1505206的辛夷药材，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，依据“2.1.1”项下色谱条件连续进样6次，以桉叶油素峰（8号峰）为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，计算RSD值，考察进样精密度，结果显示共有峰相对保留时间RSD值均小于0.083%，相对峰面积的RSD值均小于1.631%；同法考察细辛药材进样精密度，以甲基丁香酚峰（7号峰）为参照峰，共有峰相对保留时间RSD值均小于0.314%，相对峰面积的RSD值均小于2.316%。
2.3.2 重复性试验 取批号为Y1505206的辛夷药材，按“2.2.2”项下方法平行制备供试品溶液6份，依据“2.1.1”项下色谱条件分别进样，以桉叶油素峰（8号峰）为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，计算RSD值，结果显示共有峰相对保留时间RSD值均小于0.083%，相对峰面积的RSD值均小于2.715%；同法考察细辛重复性，以甲基丁香酚峰（7号峰）为参照峰，各共有峰相对保留时间RSD值均小于0.316%，相对峰面积的RSD值均小于4.831%。
2.3.3 稳定性试验 取批号为Y1505206的辛夷药材，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，依据“2.1.1”项下色谱条件在0、2、4、8、12、24 h分别进样，以桉叶油素峰（8号峰）为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，计算RSD值，结果显示共有峰相对保留时间RSD值均小于0.105%，相对峰面积的RSD值均小于1.648%；同法考察细辛药材稳定性，以甲基丁香酚峰（7号峰）为参照峰，各共有峰相对保留时间RSD值均小于0.459%，相对峰面积的RSD值均小于3.247%。均符合指纹图谱的要求，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.4 聚类分析及指纹图谱的建立
2.4.1 药材指纹图谱的测定及聚类分析 将11批辛夷、细辛药材分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，依据“2.1”项下色谱条件分别进样。将得到的指纹图谱的AIA数据文件导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004A版相似度软件中，分别以Y901/Z901作为参照图谱自动匹配，得到的匹配数据，运用SPSS统计分析软件对其进行系统聚类分析，分别将细辛、辛夷各11批药材分为2类，其中批号为Y910/Z910的药材单独成一类，其余10批聚为一类，见图1-A、B。
2.4.2 对照指纹图谱的建立及相似度评价 根据对11批辛夷、细辛药材的聚类分析结果，将聚为一类的10批辛夷、细辛药材图谱的AIA数据文件导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004A版相似度软件中生成指纹图谱及对照指纹图谱（图2、3），并分别计算相似度评价结果，计算结果见表1、2，各批之间相似度均在0.9以上。
2.4.3 共有色谱峰的指认 共标定辛夷药材共有色谱峰22个，细辛药材色谱峰11个，通过Agilent 7890A-5975C气-质联用检测分析（图3-A、B）结合NIST08谱库检索、保留时间、对照品及相关文献数据[7-10]对辛夷、细辛药材共有峰进行指认，辨识结果见表3、4。
3 讨论
3.1 色谱条件的考察
考察了Aglient HP-5（250 mm×4.6 mm，5 μm）和DB-WAX（20 m×0.18 mm，180 μm）2种不同类型的色谱柱，结果表明DB-WAX（20 m×0.18 mm，180 μm）色谱柱分离效果好、柱效高，因此选择该色谱柱。
3.2 提取条件的考察
本实验考察了水蒸气蒸馏、超声、加热回流及冷浸4种提取方式，水蒸气蒸馏法色谱峰杂峰干扰较少，超声及加热回流2种提取方式差异较小，但色谱峰杂峰较多，故选择水蒸气蒸馏法做为提取方式，并对提取时间（1、2、3、4、5 h）及溶剂倍量（10、20、30、40、50倍）进行了考察，结果表明溶剂倍量30倍提取3 h提取效率最高，已完全提取。
3.3 辛夷、细辛共有峰在六经头痛片中的归属及分析
本实验中辛夷药材22个共有峰中1R-α-蒎烯、β-月桂烯、左旋樟脑、β-蒎烯、β-水芹烯、柠檬烯、桉叶油素、萜品烯、邻异丙基甲苯、芳樟醇、(-)-4-萜品醇、α-萜品醇、古巴烯、金合欢醇14个成分在全方中均可检测得到[11]，其中金合欢醇在全方药材归属中仅来源于辛夷药材，γ-杜松烯、绿花白千层醇、Α-荜橙茄醇、橙花醇、β-香茅醇、右旋樟脑等8个成分在全方指认中未检测到，为辛夷共有峰中的特有成分，其中左旋樟脑具有中枢抑制作用，α-蒎烯具有抗炎镇痛活性；细辛药材11个共有峰中1R-α-蒎烯、3-蒈烯、δ-杜松烯、二十四烷4个成分在全方中均可检测得到，3,5-dimethoxytoluene、5-(2-propenyl)-1,3-benzodioxole、甲基丁香酚、3,4,5-三甲氧基甲苯、肉豆蔻醚等7个成分为细辛共有峰中的特有成分，其中α-蒎烯具有抗炎镇痛活性，甲基丁香酚具有一定的镇痛作用[12]。
本实验建立了辛夷药材GC指纹图谱，共标定共有峰22个，细辛药材共标定共有峰11个，并通过GC-MS及相关手段对全部共有峰进行了指认。采用相似度评价软件对不同批次的辛夷和细辛药材进行了指纹图谱评价，该方法稳定、可靠，精密度、重复性良好，为辛夷和细辛药材的质量评价和控制提供了依据，对六经头痛片的质量控制提供了参考。
参考文献（略）
来 源：张晓燕，龚苏晓，王 磊，张洪兵，朱晓丹，韩彦琪，许 浚，陈常青，张铁军. 六经头痛片中辛夷和细辛GC指纹图谱研究 [J]. 中草药, 2017, 48(20):4203-4207.
