今天讲的这篇文章，有点意思，这个是双阴性T细胞与中性粒细胞之间的互作。这篇文章就是首都医科大学北京友谊医院张栋教授团队，发表在18.8分的Sci Bull (Beijing)上的文章，这篇文章讲的是TCRαβ+的CD4、CD8双阴性T细胞（TCRαβ+也就是指这个T细胞的膜表面T细胞受体，这个涉及的是TCR信号通路，这种T细胞是αβ亚基的，不熟悉的话，可以去看看《信号通路是什么鬼？》系列的TCR信号通路），这篇文章的研究中，这种双阴性T细胞可以通过膜表面的CD39和CD73，对T细胞和中性粒细胞进行调节，缓解HIRI（肝脏缺血再灌注损伤）症状，我们就一起来看看他们做了点什么吧：
首先他们关注的是DNT，也就是双阴性T细胞，通过之前的单细胞测序结果，他们将T细胞分成了三类（下图的UMAP图，画的也就是个意思，本身的单细胞测序结果，就是通过不同的基因表达作为主成因，然后在多重的主成因结果产生后进行降维得到的图像，不清楚的话，可以去看看《列文虎克读文献》和《夏老师带你读文献》），即DNT和CD8+ T细胞以及CD4+ T细胞，对于DNT他们又细分成了三个不同的细胞亚群。在这些细胞亚群中，他们发现DNT中CD39的表达明显增高，其中cDNT这个亚群表达最高，同时，T细胞中也都会表达CD73：
CD39和CD73其实都是对于细胞外ATP进行降解的，CD39可以把细胞损伤后泄露出来的细胞外ATP水解成AMP，而CD73则会将AMP转化成ADO（腺苷）。于是他们对这一个高表达CD39的双阴性T细胞亚群产生了兴趣，由于HIRI后，由于细胞损伤，会产生大量的细胞外ATP。这类高表达CD39的DNT则可能会通过降解ATP，缓解HIRI症状。首先他们敲除了cDNT上的CD39，然后查看加入细胞外ATP后，ATP的水解情况（这其实就是柯霍氏法则的验证，通过移除关键的CD39这个因素，来查看cDNT对于细胞外ATP的水解功能是否受到影响，不清楚柯霍氏法则的话，可以去看看《轻松的文献导读》和《科研的推理和逻辑：从实验台到咖啡桌》）。结果发现敲除了CD39之后，cDNT的水解ATP功能被抑制。而将cDNT分别与T细胞或中性粒细胞共培养后，他们则发现，在加入细胞外ATP后，cDNT细胞上CD39的缺陷，可能会造成T细胞死亡，或抑制中性粒细胞活化。而使用无法被CD39水解的ATPγs，也能促进cDNT细胞的凋亡：
那么既然CD39是通过水解ATP后，得到AMP，再由CD73将之转换为ADO的。于是他们提出了假设，假设ADO的受体，可能参与细胞外ATP对cDNT以及中性粒细胞的影响（这里其实就是对于原有假设进行了迭代，通过已知的CD39的功能，以及CD39/CD73对于细胞外ATP的降解，提出了ADO是否会参与功能这个新的假设，假设通过迭代后，才能更好地推进课题进展，不清楚假设和假设迭代的话，可以去看看《科研的推理和逻辑：从实验台到咖啡桌》、《列文虎克读文献》和《信号通路是什么鬼？》系列）。他们首先筛选出中性粒细胞上的ADO受体，然后对其进行了敲除，结果发现中性粒细胞上ADO受体A2AR和A2BR的敲除，与敲除了cDNT细胞上的CD39有异曲同工的作用，缓解了中性粒细胞的死亡，也就是NETosis。而另一方面在培养cDNT的过程中，加入ADO会促进cDNT上的A2AR表达升高，而加入ADO之后，可以缓解cDNT细胞的死亡。细胞外ADO通过A2AR诱导中性粒细胞凋亡，同时还会调节cDNT活力以及其抑制活性：
那么ADO激活了A2AR后，在cDNT细胞中，激活了什么信号通路呢？通过敲减A2AR后的转录组分析，他们发现FOXO1下游的信号通路被激活了。而FOXO1上游，抑制其活化的AKT的活性被明显抑制（这里就不得不回去再复习一下FOXO信号通路和PI3K-AKT信号通路了，AKT磷酸化激活后，会通过磷酸化FOXO1抑制其活性，不熟悉这些信号通路的话，可以去看看《信号通路是什么鬼？》系列里的FOXO信号通路和PI3K-AKT信号通路）。通过验证他们发现，ADO的确能抑制AKT的磷酸化，并促进FOXO1的激活。而FOXO1会结合NKG2D、NKG2C、CD94和存活素的启动子区域，并激活转录。在使用ADO刺激的cDNT，以及NKG2D拮抗剂，能影响促进中性粒细胞的凋亡，并抑制NETosis：
最后，他们分析了CD39缺陷对于HIRI肝损伤的影响，明确了CD39有助于cDNT在HIRI中的治疗效果。而另一方面他们也检测了cDNT的A2AR缺陷，对于HIRI过程中对于肝损伤的影响，结果发现cDNT的A2AR缺陷，在体内消除了HIRI中的cDNT保护：
最后，就形成了这样的示意图，HIRI肝损伤导致大量的细胞外ATP产生，而细胞外ATP通过cDNT细胞亚群中的CD39和CD73,转化成了腺苷，腺苷通过其在cDNT细胞上的受体A2AR，抑制了cDNT细胞内的AKT磷酸化，促进了FOXO1的活化，转录激活了NKG2D、NKG2C、CD94和存活素等基因，提高了cDNT细胞的存活率，通过NKG2D的表达增强了其对于中性粒细胞的免疫抑制效果。而另一方面腺苷会通过中性粒细胞上的ADO受体A2AR和A2BR，促进中性粒细胞的凋亡，抑制中性粒细胞的NETosis，并且抑制中性粒细胞中炎症因子的产生：
这篇文章的思路还是挺清晰的，通过cDNT细胞亚群上CD39和CD73的表达增多，提出ATP腺苷代谢变化的影响，进而分析了ADO以及其受体对于cDNT免疫抑制的功能。好了，今天就先策到这里吧，有兴趣的话可以看看原文，祝你们心明眼亮。
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