我有一些极性很强的化合物需要分析。我在标准C18柱上的保留有问题。我该怎么办?
答:你并不孤单。这个问题越来越多地出现在讨论HPLC问题的公告栏上。好消息是，对于这个问题有几种解决方案，其中一种或另一种可能适用于您的特定问题。
问:哦,好。听到这个我很高兴。这些解决方案是什么?
答:总的来说，有三种可能性可以用来获得良好的保留极极性化合物。第一种方法是从反相色谱柱切换到HILIC色谱柱。
问:HILIC吗?那是什么?
HILIC是亲水性相互作用色谱的缩写，这个术语最初是由Andy Alpert(1)使用的。它适用于极性固定相，如二氧化硅和有机溶剂含量高、水含量小的流动相。保留机制与反相相反。极性化合物的保留力更强，当流动相含水量增加时，保留力降低。最著名的例子是在氨基色谱上分离糖，这项技术首先由Fred Rabel和Art Caputo发表(2)。在这种情况下，流动相由大约75%的乙腈和25%的水组成。该技术的基本原理是将被分析物分配到富含水的表层(3)。因此，被分析物在水中越易溶解，所观察到的保留力就越大。相反，被分析物在流动相中的可溶性越差，所观察到的保留量就越大。这种技术可以通过其他的保留机制进一步增强，如离子相互作用或离子交换(4)。
该技术的难点之一是极性样品在高浓度乙腈流动相中的低溶解度。然而，它并没有你想的那么糟糕。此外，您可以将样品溶解在含水量高于流动相的溶剂组成中，甚至可以溶解在纯水中。如果你这样做了，你只需要减少进样量这样你就不会得到畸变峰。
一般来说，重要的是要记住HILIC对在水中具有良好溶解度的极极性样品最有效。
问:好，听起来不错。还有其他的选择吗?
第二种可能性是使用专为保留极极性化合物而设计的反相色谱柱。一些最好的标准反相色谱柱的问题是它们不能用于含有100%水的流动相。
问:没错。当我尝试使用一个含水量很高的流动相时，我不能得到可重复的保留，有时我得到的保留比我认为我应该得到的要少。
答:是的，这就是我所说的问题。它有时被称为“疏水塌陷”，但更好的表达是“毛孔去湿”。现代非常疏水和非常失活的相松散保留在高度水的流动相。根本的问题是固定相与水的润湿性。由于水不润湿表面，它从全部或部分填料的空隙间排出。表面变得“未湿”，并失去保留。
有两种方法可以使反相填料与水相流动相更相容。第一种是将一个极性基团合并到固定相中，可以内置到配体中，也可以作为第二种反应。带有极性基团的固定相中典型官能团是酰胺或氨基甲酸酯基团(5)。这些极性官能团防止了疏水塌陷，但也在一定程度上降低了固定相的疏水性。因此，它们可以改善填料的保留性能，但还有更好的解决方案。
第二种解决方法是减少引起疏水塌陷的疏水效应。疏水塌陷是一种润湿现象。如果我降低C18配体的配体密度，我可以使反相填料仍然是非常疏水的，但也是水可湿的。这需要很好地理解填料的潜在特性，以及不同参数对润湿性和保持性的影响。填料已经充分平衡了疏水性和水润湿性(6)。像这样精心设计的反相填料在完全水的流动相中仍然有良好的保留，而不会发生疏水性崩溃。
第三种选择是什么?
答:最后一个选项取决于你所使用的分析物的类型。如果它们是离子化合物，如胺或酸，它们可以通过改变流动相的pH值转化为中性形式。胺在pH值为10左右的碱性环境中可以转化为中性的不带电形式。在这种情况下，色谱保留增加了一个很大的因素。通常通过改变pH值将分析物从离子形式改为非离子形式，可以发现保留值增加10- 30倍。当然，你需要一种专为高ph值而设计的填料。幸运的是，这种类型的填料现在已经可用(7)，而且这个过程可以非常有效地使用，没有困难。
谢谢你对不同选择的描述!我的化合物是带有酸性和碱性的极性化合物。看来这些解决办法对我都适用。你推荐哪一种?
如果没有实验细节，这可能很难预测。我已经提到了使用HILIC时分析物在流动相中的溶解困难。在反相解决方案中，我会选择专门优化过的解决方案，目的是为你需要分离的极性化合物类型实现高保留,然而，您还需要考虑，这些解决方案中的任何一个都可以提供您所需要的改进。此外，不同溶液的分离选择性也可能不同。因此，在大多数情况下，探索多个工具可能是值得的。
药事纵横投稿须知：稿费已上调，欢迎投稿
各位朋友好，觉得本文对您有帮助，请随手点一下下方的在看，以便让你的朋友也能看到哦
