单细胞测序是一种新一代测序(NGS)方法,可检测单个细胞
的转录组,提供细胞间变异的高分辨率视图。不同于传统RNA
测序(RNA-Seq)对细胞群进行的批量采样,高灵敏度的单细
胞RNA 测序(scRNA-seq)法可帮助研究人员探索复杂组织
中单个细胞的不同生物学特性,了解细胞亚群对环境要素的反
应。这些检测方法有助于研究细胞功能和细胞分化、增殖、
肿瘤发生等一系列与时间有关的生物过程异质性。
scRNA-Seq与批量采样方法相比具有多项优势,这些优势让
研究人员能够:
NextSeq
™
1000/1000-CN和NextSeq
™
2000/2000-CN测序系统(以下统称“NextSeq
™
1000/2000系列测序系统”)采用因美纳边合成
边测序(SBS)XLEAP-SBS™ 化学技术作为完整scRNA-Seq工
作流程的一部分。scRNA-Seq包括初始组织制备、一系列单
细胞分离和文库制备选项、测序和初级分析,以及数据可视化与
解读(图1)。
图1:NextSeq 1000/2000 scRNA-Seq工作流程⸺NextSeq 1000/2000系列测序系统是集成式NGS工作流程的一部分,该流程首先是组织制备,然后是单细胞分离和文库制备,接下来是测序和初级分析,最后是数据可视化和解读。
NextSeq™ 1000/2000
系列测序系统
图2:NextSeq™ 1000/2000 系列测序系统
NextSeq
™
1000/2000系列测序系统(图2)具有强大的功能和灵活性,
可满足多种多样的项目需求,允许调整每个样本的细胞数、每
个细胞的read数和每次实验的样本数。无论研究人员是想要
实现深度测序以获取低丰度转录本,还是想要对更多细胞或样
本进行测序,NextSeq
™
1000/2000系列测序系统都为测序和
初级分析提供了经济高效的台式测序仪。提供四种流动槽类型,
研究人员可以灵活地使用多种NGS分析方法,并满足各种实
验设计要求。如果需要更高的样本通量,可以使用NovaSeq™
X系列扩大研究规模(表1)。
表1:因美纳基因测序仪的单细胞RNA-Seq样本通量
a. 按每个样本含5000个细胞,每个细胞测2万读数对计算;包括38 个额外循环,可支持唯一分子标记(UMI)。实际情况中,每个样本包含的细胞数量和每个细胞的测序深度应取决于具体应用和样本类型
b. P1 试剂是质量控制实验的不错选择
c. P3 和P4 试剂仅适用于NextSeq 2000/2000-CN基因测序仪
d. NovaSeq X Plus基因测序仪支持单流动槽运行或双流动槽运行。NovaSeq X基因测序仪仅支持单流动槽运行
NextSeq
™
1000/2000系列测序系统(图2)采用因美纳边合成
边测序(SBS)XLEAP-SBS™化学技术作为完整scRNA-Seq工
作流程的一部分。scRNA-Seq包括初始
NextSeq
™
1000/2000系列测序系统采用了XLEAP-SBS化学技
术,这是因美纳迄今为止最快、数据质量最高、最可靠的SBS
化学技术。XLEAP-SBS化学技术以成熟的标准因美纳SBS化学
技术为基础,可提供更高的试剂稳定性,使核苷酸结合时间缩短
两倍。对于scRNA-Seq来说,这可以在检测基因、转录本和单
细胞条形码时获得更准确的倍数变化预计和更高的灵敏度。在所
有因美纳台式基因测序仪中,NextSeq
™
1000/2000系列测序系
统拥有最高的read通量和最低的read 单价,有助于研究人员:
组织制备、一系列单
细胞分离和文库制备选项、测序和初级分析,以及数据可视化与
解读(图1)。
-
每个细胞获得更多的read,以捕获有关低丰度转录本的信息
-
在给定的研究预算内,可对更多细胞和样本进行测序,为实
验设计提供支持
-
获得其他条件、时间点或方法以研究生物学更复杂的方面
除scRNA-Seq外,NextSeq
™
1000/2000系列测序系统提供
了跨应用的灵活性,让研究人员能够在多个测序项目之间轻松
转换。该系统与Illumina 以及第三方的一系列文库制备试剂
盒兼容,可实现群体细胞RNA-Seq、单细胞RNA-Seq、外
显子组测序及其他应用之间的轻松转换。P4 流动槽的通量更
高,可提供更多多组学信息。例如,研究人员可在NextSeq
™
1000/2000系列测序系统上将scRNA-Seq与外显子组测
序结合在一起,评估编码变异是否影响转录本表达,或开展
ATAC-Seq*分析染色质可及性,更好地了解功能调控。