采集前先用75%酒精消毒液消毒病变部位皮肤，选择病灶活动边缘，以无菌取样刀刮取皮屑。刮取皮肤标本多选用钝刃的无菌连柄取样刀，以不出血为度。采集水疱标本应取疱壁组织检查而非疱液;采集浸渍发白病灶时，应先刮除表面白色、已浸软的角质，采集贴近真皮表面或病损活动边缘的皮屑；若皮肤破溃应采集病损边缘的脓液或组织等；若鳞屑量少，可先用无菌取样刀刮取后采用透明胶带粘贴法采样。
样本前处理流程图：
将标本置于玻片上，加一滴10%氢氧化钾溶液，滴加免疫荧光试剂，盖上盖玻片，在酒精灯火焰上稍加热溶解角质，轻轻加压盖玻片，即可置于显微镜下观察。注意：透明胶带法取材的制片方式——载玻片上先滴加免疫荧光试剂后，再将透明胶带贴在载玻片上，无需加盖玻片。
将皮屑置于载玻片上按需求标注信息。
这里需要补充一点信息，关于日本的真菌指南《2019 JDA指南：皮肤真菌病的管理》中对于皮肤真菌检测处理流程。
从病变部位取样，放在玻璃载玻片上。为防止出现假阴性，必须尽可能多地从可能富含真菌成分的病变部位（如足癣的囊盖和体癣的环状病变的鳞状边缘）采集材料。
将盖玻片盖在样本上。
在盖玻片和玻璃载玻片之间注入少量 10-30% 的 KOH 溶液，浸入样品并轻轻加热。在 KOH 溶液中加入 20-40% 的二甲亚砜可促进样品的澄清。可使用市售的 ZoomⓇ（由 Nipro 生产，Hisamitsu Pharmaceutical 代理）。通常将载玻片放在酒精灯火焰上加热；放在热板上也是一种方便的选择。充分清除角质有助于准确观察。为进一步方便观察，可在 KOH 溶液中加入浓度为 0.1% 的氯唑黑 E 对样本进行染色。对于癣菌和马拉色菌毛囊炎，可在清除材料时使用 Zoom BlueⓇ（Nipro 生产，久光制药经销）进行染色。酸性亚甲基蓝溶液可用于对马拉色菌进行非常清晰的染色，但不能与 KOH 溶液混合使用。
轻轻按压盖玻片，用一小块滤纸擦去盖玻片周围多余的 KOH 溶液。在头癣和倒刺癣的情况下，过大的压力会破坏毛发的结构，从而难以确认毛发中真菌的寄生状态（内生型、外生型或小孢子菌型）。
使用 10X目镜和 10X物镜在显微镜下观察载玻片。为增加对比度，可缩小光圈环并降低聚光镜进行观察。另一方面，在较高倍率下打开光圈并升高聚光器可观察马拉色菌属。
重点来了：
首先是加氢氧化钾的浓度不同，国内基本上是10%的氢氧化钾，日本人是发财了吗？
再就是他们还加入了国内没使用的二甲亚砜
还有就是除了国内也使用了的酒精灯加热，还推荐了放置在热板（
这翻译我猜不对，不过我不纠结了，我大概明白什么意思
）上。
今天去做实验的时候，我就使用了恒温加热仪，效果确实更好，大概应该是这个理由吧！
后续的一些方法，我查的国内资料也没有提供（当然，可能只是我没查到而已，我确实只是随便抄了一点），也可以参考一下。
制片流程：
置于荧光显微镜下观察或者上机检测。
根据荧光显微镜的结果判读出具检查报告或者根据仪器的判读，根据镜下
或仪器
所见形态，可以判断是否存在真菌感染。如果见到出芽孢子或菌丝，则可以提示为真菌阳性。检查无误点击生成报告。
注意事项：
（1）为了提高检查准确度，最好停用一切外用药物一周再进行检查；
（2）皮损有破溃糜烂时最好首选局部控制感染再进行皮肤刮片，以免局部感染加重或扩散；
（3）皮屑较厚时，医生需要用刮刀去除部分皮屑，再对皮损进行检查；
（4）对于临床高度怀疑真菌感染，但真菌检查阴性的病例，建议定期复查；
（5）样本及时送检，避免污染。
