抗体买错了？肯定没注意这些细节！

最近我们实验室要买一批抗体，一些信号通路的磷酸化抗体，以及一些流式抗体，由于货值较大，这个事情老板就交给了我，因为老板知道我污小贼在读他博士之前，还干过两年的进口抗体销售工作嘞（哪一家就不说了，以免做广告），想让我精挑细选，价格多砍砍。

另外一个重要原因，老板怕选错抗体，因为抗体退货比较难。

污小贼以前做销售工作的时候，也会碰到蛮多粗心的童鞋把抗体名称搞错的，把抗体能做的实验类型搞错的，把抗体的来源搞错的，有的把抗体的储存条件搞错的，等等，有的童鞋会说：我不管，我就要退，谁让你当时没跟我讲清楚！但其实销售公司也是很冤的。

（一）抗体选择常见错误？(以HIF-1α为例)

当咱们在搜索抗体“HIF-1α”的时候，可能有以下抗体信息

1.抗体名称容易出错

抗体一般以抗原来命名，名称核对时最简单也最容易犯错，有些蛋白质有不同亚基（HIF-1α、HIF-1β）；有些蛋白质有不同磷酸化状态，例如EGFR和p-EGFR的区别，等等。

除了蛋白质的名称外，有其他后缀，例如上图中“Chip grade”表示该抗体纯度得到优化，适合Chip实验。

因为Chip实验的细胞裂解物本身就比较复杂，所以抗体要求更加纯净一些，当然，价格嘛，嘿嘿。

2.单抗的克隆号

例如上述列表中的（3C144）、（H1alpha 67）都是抗体的克隆号（clone number），克隆号一般是用来标示单克隆抗体的抗原表位的，但是这个号本身就像实验室样品编号一样，没有具体的含义，只是标示这个抗体筛选自哪一株细胞，只有克隆号一致的抗体，抗原表位是完全相同的。

单克隆抗体制备时，需要先制备融合细胞群，这些10^6个融合细胞们会被随机分配到有限的几个96孔板，那么就有可能有10^6种单抗细胞株，那么有些孔是阴性，有些孔是阳性，后续的2~4轮阳性孔再分配（subclone，亚克隆）过程中，看哪一个细胞株的抗体特异性和识别能力最好。最后筛选出来的抗体会获得一个编号，这个编号可以根据制备抗体的习惯，或者是需要设定，例如我第一次亚克隆，发现第5块96孔板的E11孔有阳性结果，最终分离出来的克隆号我就可以命名为5E11。

例如3C144可以获得理想的结果，下次再买，但是克隆号变成H1alpha 67的话，有可能实验条件就需要调整，或者调整后也不能获得理想的效果。

总之一句话，选定一个克隆号后，千万别轻易更换！

但多克隆抗体没有克隆号！

3.多抗和单抗不同

单抗上面介绍过了，而多抗(polyclonal antibodies)一般用兔子、山羊等大型动物，因为多抗是直接从血液中纯化提取出来的，而不像单抗是用细胞培养出来的。

有些童鞋会问，单抗不就好了吗？其实不然：

单克隆抗体的优点是产量持续稳定、特异性较高、但灵敏度不如多抗。如果对抗体的特异性要求高，用量较大或需要长期使用一致的抗体，制备的抗体应用要求多（WB/IP/IF/ICC等)，可以选择单克隆抗体。

多抗的特异性较差，存在批间差(因为兔子的血被放光挂掉了，而山羊可以常年养着，放点血出来，在养几天再放血，好残忍)，易造成背景，例如在WB中有杂带，在IHC中背景较深等等。但由于多抗识别多个抗原表位，对于丰度偏低的蛋白也更容易检出。

4.抗体应用类型选错了？

抗体是用抗原蛋白质免疫之后获得的，但抗原有可能是从动物体内直接纯化的，也有可能是体外重组表达抗原的一小段作为免疫原，那么产生出来的抗体就不同。一般来讲，所有的抗体都可以做WB实验。

免疫试验有很多，但实验目的不一样，例如WB, ELISA,IP, IF, ChIP, IHC(P),FACS，其中只有WB是一种需要将蛋白质变性实验，用强烈的蛋白变性剂SDS和β巯基乙醇，将蛋白质的三维结构全部抹去，这种情况下任何一种该蛋白的单抗都能识别WB实验中变成直线状态的抗原；但能做WB的单抗就不一定能用来做非变性试验IP、IF、IHC了，因为天然的蛋白的三维结构隐藏了很多抗体结合位点。

我感觉我这幅画可以拍2个亿

另外若选择抗体来做ELISA实验，则需要可以识别两个不同决定表位的抗体，这个只能自己实验才知道。

 5.其他注意事项

保存温度一定按照说明书，温度放错，抗体容易失效或者长菌；

Species，指的是可以识别检测哪些物种的抗原，和抗体的宿主要区别开，抗体制备遵从的原则是抗原尽量选取保守区，因为这样能够识别多个不同物种；

那么好了，一抗选好了，就该选二抗了，二抗该如何选择呢？举个栗子，从小鼠的抗原注入到兔子身上，出来的这种抗体为兔抗鼠的一抗，你的二抗就必须是抗兔的多抗，比如羊抗兔。

（二）抗体选错的黑锅，销售公司也冤

1.首先，大部分的普通一线销售人员非硕士博士出身，他们精于报价、把控货期、负责售后很在行，而面对几十万种抗体，限于专业知识以及谨慎角度出发，销售人员不敢胡乱给你推荐，除非你要购买一些明星蛋白的抗体，销售数量巨大，他们才会积极推荐，对于大部分的抗体名称、应用、亚型的匹配和筛选，还是要依靠购买人亲自把关，可以找销售公司的技术支持，或者品牌商的技术支持，仔细询问。

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2.其次，各大进口抗体品牌商，比较知名的C品牌、A品牌、N品牌、S品牌等，待订单确认后就会海运发货，发货后就无法再取消订单，因为抗体本身根本不值钱，100ug的抗体，纯材料成本就几块钱，跟水没什么两样，但是退货给海外引发的成本（人工成本等）就太大了，得不偿失，所以有时候会遇到稍微弱势一点的品牌商宁肯再重新给你发一支。

其实有时候可以选择采购国产抗体，但仅限文献里被验证过的国产抗体。二抗买买国产的问题也不大了，技术比较成熟。出现了问题，处理起来都好说话，毕竟都是中国人，没有老外参合。

3.然后，各大品牌商不直接销售，而是会委托国内销售公司，销售公司的目的是什么？盈利！销售人员的目的是什么？赚钱养家呗。得罪你一人会给公司带来多大的损失？也许很大，也许很小，一般的销售公司都会坚决拒绝非己方原因的退货，反而会让销售人员承担压力，万一退货销售人员要被重罚的。

4.最后，销售人员每个月都背着巨大的销售数字，压力很大的，好不容易卖给了你，除非得罪你的成本比几支抗体的价格高很多，得罪你就等于断了在你们实验室的财路，否则销售人员是绝对不会退货的！选购抗体前，要认真筛选。当然林子大了什么鸟都有，暴利也驱使很多皮包公司制假造假，销售假冒伪劣产品，严重扰乱了科研工作。大家选择销售公司的时候要多方核实其正规性。

（三）全球抗体品牌排行榜

TOP10品牌文献引用率

TOP20官网访问量最多的抗体品牌商排行

TOP20文献引用率增长最快的抗体品牌商

（国内品牌势头很猛）

参考资料：www.antibodypedia.com

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