案例分享：研究方法、实验手段和关键技术，该怎么区分？

写过国自然本子的都知道，研究方案部分有以下几个组成部分：“研究方法、技术路线、实验手段和关键技术等”。

• 那么研究方法、实验手段和关键技术，三者之间又有什么不同呢？看起来好像啊，我迷糊了。
• 这个“关键技术”指的是什么？有几种写法呢？

  
  

（一） 研究方法、实验手段和关键技术 的区别和关系

研究方法、实验手段、关键技术是申请书最重要的内容。这几部分即相互联系，又有区别。

1) 研究方法。 说明研究所采用的方法， 把研究对象、研究材料、实验手段形成比较连贯的表述语句，已达到某种研究目的。如增殖、侵袭、转移分别对应什么方法，检测的目的是什么等；如数据挖掘的聚类分析、异常检测等方法，研究目的是什么。

举个例子：

细胞表型和Hippo信号通路的激活水平检测： 使用20μM浓度TMZ培养上述各组细胞，检测细胞中的 XXX 、 YYY 的表达水平，检测Hippo- YYY 通路相关蛋白（ ZZZ 、 AAA ）的表达水平和磷酸化水平，CCK8法（日本同仁化学）检测细胞活性、BrdU 试剂（MCE中国）检测细胞的增殖能力、Annexin V-FITC/PI方法流式细胞术检测细胞凋亡情况、Transwell检测细胞侵袭能力、划痕实验（wound healing）检测细胞的转移能力， 评估细胞对TMZ的敏感性；RT-qPCR、WB检测 XXX 、 YYY 表达水平，Hippo- YYY 通路相关蛋白（ ZZZ 、 AAA ）的磷酸化水平。

2) 实验手段。 与研究方法、技术路线相对应，包括计划做哪些实验，如何做，用何种实验方法，实验步骤如何？需要检测的技术指标及最后达到的目标等。

例如，承接上述研究方法，对应的实验手段如下：

①　CCK-8实验：细胞计数，以每孔2000个细胞的密度铺于96孔板中，每组三个复孔。细胞放入37℃恒温培养箱中培养48小时，分别在不同的时间点加入10μL Cell Counting Kit-8试剂 （日本同仁化学） 后放入37℃、5%CO ₂ 恒温培养箱。在30min、60min、90min、120min的时间点上机检测；利用酶标仪测定在波长为450nm处的OD值，计算每组细胞的增殖能力。

②　Transwell实验：如前所述300多字，把实验步骤描述一遍。

③　Western blot实验：如前所述300多字，把实验步骤描述一遍。

④　RT-qPCR实验：如前所述300多字，把实验步骤描述一遍。

⑤　RIP或者RNA pulldown技术、类器官实验手段。。。等等

3) 关键技术。 解决关键问题采用的技术。 因此，关键词就是“ 关键科学问题”的解决。

（二） “关键技术” 的表达方式 有几种写法呢？

青椒哥的建议至少有两种写法

首先第一种 叫做“在实验手段中标注”，怎么理解？

例如某部分研究方法的实验手段如下格式写完了：

1)Transwell实验：XXXXXXXXXXXXX。

2)Western blot实验：XXXXXXXXXXXXX。

3)RT-qPCR实验：XXXXXXXXXXXXX。

4)RIP （关键技术） ：XXXXXXXXXXXXX。

5)RNA pulldown （关键技术） ：XXXXXXXXXXXXX。

6)类器官实验 （关键技术） ：XXXXXXXXXXXXX。

然后第二种 是重新开辟一段“关键实验技术”

格式大致如下：

在这一部分，你可以把主要实验手段按照以下部分进行概括：

①　细胞功能部分关键技术：CCK8是基于XXX原理检测细胞增殖情况的；EDU是基于YYY原理获得细胞增殖情况的；TUNEL方法是基于ZZZ原理，实现细胞检测结果的；ELISA负责检测蛋白的表达水平；WB负责检测蛋白的表达水平和分子量大小；qPCR获取的是蛋白的mRNA的表达水平信息……

②　分子实验部分：RIP、RNA pulldown获取蛋白-RNA分子互作信息；CO-IP、GST pulldown获取的是蛋白和蛋白互作信息……等等

③　动物实验部分……此处省略N个字儿。

因此，通过研究方法、技术路线图、实验手段以及关键技术的不同维度的呈现，使得你的研究方案更加立体，显得可行性极高。