随着上周WHO宣布
猴痘疫情进入全球突发公共事件以来，猴痘诊断检测开发和注册又在行业掀起一波热潮。今年，刚果民主共和国已发现超过15600例猴痘病例和537例死亡病例，儿童受到严重影响。
2022年WHO建议对符合猴痘疑似病例的患
者进行检测，主要检测方法为分子核酸技术，如qPCR或LAMP，因为
分子检测
技术具有灵敏度
和准确性，是猴痘诊断的首选实验室检测
。最好的诊断样本类型是直接从皮疹中获得，如皮肤样本、液体或痂皮。如果没有皮肤病变，可以使用口咽、肛门或直肠拭子进行检测（不建议使用血液样本）。
随着猴痘的继续扩散，为了解猴痘病毒的传播途径而展开了更多研究，WHO的建议也发生了变化，包括新的检测样本类型和新的诊断方法如血清学检测。总的来说，早期诊断、隔离、有效的接触者追踪和疫苗接种将是有效控制疫情的关键。
在CDC曾今发布的猴痘病毒qPCR检测方
法中推荐了猴痘分子检测的试验设置和程序，该指导中推荐
理想的猴痘样本类型是储存在病毒保存液(VTM)中的皮肤病变样本
。
CDC和WHO建议，应从疑似猴痘感染患者的皮肤病变处取得至少两份样本，最好是从身体的不同位置和不同外观的病变处获得。也可以使用口咽拭子，但是这种样本类型用于诊断猴痘的准确性数据目前有限。从全血中提取的DNA被认为不是合适的样本，因为在皮疹发作时感染的病毒期可能已经过去。
为了提高检测能力，
越来越多的体外诊断制造商正在根据CDC和WHO的建议开发新的猴痘分子检测。
选择与病变拭子和VTM精确匹配的最佳试剂是开发高灵敏度和高特异猴痘检测的关键。
尽管VTM可用于维持病毒的稳定性，但有些VTM的配方会灭活病毒和细菌，其中某些成分可能会抑制样品中核酸酶的活性。如果在检测前不去除或灭活这些抑制成分，就会影响分子检测结果。
Meridian迈迪安提供几种优化的分子qPCR/LAMP预混液，非常适合用于开发猴痘诊断测试，包括
唾液样本特异性qPCR/LAMP预混液
。由于VTM是猴痘样本运输和保存的首选保存液，迈迪安的唾液样本特异性qPCR预混液可以有效地克服VTM中存在的抑制物，
提供高灵敏、高特异的快速猴痘诊断检测，适用于非洲这样条件有限地区的高效分子POC检测需求
！
02
迈迪安猴痘分子诊断开发相关案例
迈迪安推出的
Lyo-Ready可冻干唾液直扩LAMP预混液(MDX134)
和
Air-Dryable可风干唾液直扩qPCR预混液(MDX130)
经过优化，可用于含有一系列含有抑制物的液体样品，包括VTM
。
通
过试验，使用了专门用于MPXV检测的引物和探针，来检测预混液在10%VTM和20%VTM样品中对MPXV DNA的扩增能力。此外，还对唾液混合物样本进行检测，并且与NEB和Themo的预混液进行了平行对比，以验证迈迪安的预混液在MPXV检测方面的卓越性能。
检测设计了两组引物，一组用于检测猴痘A型包含物(ATI)基因区域 (西非毒株中特有的453-核苷酸残留，刚果盆地毒株中没有)，另一组用于检测肿瘤坏死因子受体基因中的G2RG区域(该区域能够检测所有已知MPXV 毒株)。
研究：Lyo-Ready可冻干唾液直扩LAMP预混液(MDX134)对VTM中猴痘靶标ATI 基因的扩增速度和可重复性
在第一项研究中，将迈迪安Lyo-Ready可冻干唾液直扩LAMP预混液的扩增灵敏度与NEB WarmStart®和Thermo SuperScript
TM
IV进行了比较，对10%VTM或20%VTM样本中的6000、600或60个拷贝MPXV DNA进行扩增。
结果显示，Lyo-Ready可冻干唾液直扩LAMP预混液对所有样本扩增速度都是最快，出峰时间(TTR)最早，
体现了更高的灵敏度和可重复性
，尤其在病毒DNA拷贝数较低的情况下。
Lyo-Ready可冻干唾液直扩LAMP预混液
(MDX134)与ATI引物冻干后，对10% VTM或20%VTM中10倍连续稀释的MPXV DNA样本(分别为6000、600和60个拷贝)进行扩增，与NEBWarmStart®和Thermo SuperScript
TM
IV 进行平行
对比，比较检测出峰时间(TTR)。
为了进一步检测性能，分别使用Lyo-Ready可冻干唾液直扩LAMP预混液(MDX134，
红色
)、NEB WarmStart®(
橙色
)和Thermo SuperScript
TM
IV(
黑色
)对10%
VTM 中60个拷贝的MPXV DNA和20% VTM中600个拷贝的MPXV DNA进行扩增。结果显示，Lyo-Ready可冻干唾液直扩LAMP预混液具有更快的反应速度和特异性，TTR更早且有更高的可重复性，特别是在病毒DNA拷贝数较低的情况下。
研究：Air-Dryable
TM
可风干唾液直扩qPCR预混液(MDX130) 对猴痘靶标ATI和G2R-G的扩增速度和可重复性
第二项研究使用2000、200或20个拷贝的MPXV DNA样本(每个浓度样本至少检测6个技术重复)，分别使用Air - Dryable
TM
可风干唾液直扩qPCR预混液和Thermo的TaqPath
TM
ProAmp Multiplex MasterMix进行扩增，来比较检测的灵敏度和重复性。
结果显示，Air Dryable
TM
可风干唾液直扩qPCR预混液具有更强的可重复性，
对MPXV检测有更高的灵敏度和特异性
，特别是在病毒DNA的拷贝数很低的时候。
分别使用风干后的Air - Dryable
TM
可风干唾液直扩qPCR预混液 (MDX130,红色)和 Thermo TaqPath
TM
ProAmp Multiplex Master Mix(黑色)对10倍连续稀释的MPXV DNA 样本(分别为2000、200和20个拷贝) 进行扩增，靶标为ATI，G2R-G 和人体RNase P (内标)。结果显示，Air - Dryable
TM
可风干唾液直扩qPCR预混液具有更高的灵敏度、特异性和可重复性，尤其是在病毒DNA拷贝数很低的情况下。
03
迈迪安
助力猴痘诊断开发的一站式原料
免疫原料
：
包括三种由大肠杆菌表达的重组抗原，可用于开发IgM抗体检测分析。这些抗原代表主要病毒颗粒核心蛋白和膜蛋白的免疫优势区域，是人体中和抗体的主要目标。
|
产品编号
|
产品名称
|
|
|
猴痘P4a重组抗原
|
|
R01805
|
猴痘A5L & A11L重组抗原
|
|
R01806
|
猴痘H3L重组抗原
|
|
BN1179
|
猴痘A29L重组抗原
|
|
BN1206
|
猴痘A29L单抗（捕获）
|
|
BN1207
|
猴痘A29L单抗（检测）
|
分子原料
：
迈迪安研发的可冻干和可风干Specimen-specific
TM
唾液直扩qPCR/LAMP预混液，
可以用来直接检测病变拭子和VTM样本
，具有超强的抑制物耐受性能，用于开发可常温储存的更快速、灵敏和可重复的猴痘分子检测。
这些即用型预混液经过充分优化，只需要添加引物和探针，能够加速体外诊断制造商开发猴痘检测的时间，减少对VTM样本中抑制物兼容性问题的反复优化过程，是开发猴痘分子POC检测的最佳选择。
迈迪安的可冻干和可风干qPCR和LAMP预混液不仅可以在液体体系中使用，并且可以通过冻干或风干干造成常温稳定的检测，在室温下稳定性可以保持至少18个月。
