溴莫尼定对视网膜神经节细胞氧化应激损伤的保护作用

参天学术资讯 · 公众号 · · 2018-04-02 11:55

正文

【摘要】 目的探讨溴莫尼定对视网膜神经节细胞(RGCs)氧化应激损伤的保护作用. 方法小鼠RGC-5细胞株在含低糖(1 g/L)、体积分数10％胎牛血清和100 U/ml(商品单位)青链霉素混悬液的DMEM培养液中进行培养,将传代的RGC-5细胞分为正常对照组、H2O2处理组和溴莫尼定+H2O2处理组.H2O2处理组在细胞培养液中加入800 μmol/L H2O2,溴莫尼定+H2O2处理组在细胞培养中加入1 μmol/L溴莫尼定处理2h,然后加入800 μmol/L H2O2,各组细胞继续培养24 h.采用Hoechst荧光染色法观察各组细胞的细胞核形态和数量变化;采用Western blot法测定各组细胞中凋亡相关蛋白bcl-2和bax蛋白相对表达量变化;采用荧光标记JC-1试剂盒检测细胞线粒体膜电位改变.结果正常对照组细胞核呈圆形或椭圆形,细胞核大小均匀;H2O2处理组可见细胞核固缩和碎裂,细胞核数量减少;溴莫尼定+H2O2处理组出现核固缩和碎裂的细胞核明显少于H2O2处理组.正常对照组、H2O2处理组和溴莫尼定+H2O2处理组细胞中bcl相对表达量分别为0.76土0.15、0.50±0.13和0.75±0.17,H2O2处理组细胞中bcl-2相对表达量明显低于正常对照组和溴莫尼定+H2O2处理组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).正常对照组、H2O2处理组和溴莫尼定+H2O2处理组细胞中bax相对表达量分别为0.65±0.13、0.83±0.07和0.70±0.10,H2O2处理组细胞中bax相对表达量均明显高于正常对照组和溴莫尼定+H2O2处理组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).正常对照组RGC-5线粒体膜可见较强的橙色荧光,与细胞膜绿色荧光共表达;H2O2处理组细胞中橙色荧光减弱且表达JC-1的细胞数量减少;溴莫尼定+H2O2处理组细胞线粒体膜橙色荧光较H2O2处理组增强,JC-1阳性细胞数量明显增多. 结论溴莫尼定预处理能够预防氧化应激导致的RGCs线粒体损害,从而发挥视神经保护作用.

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