PI4KIIα特异底物竞争小分子抑制剂PI-273抑制乳腺癌作用及机制
8月21日，《癌症研究》（Cancer Research）杂志在线发表了中国科学院生物物理研究所陈畅课题组与上海药物研究所罗成、蒋华良课题组合作的研究论文PI-273, a substrate-competitive, specific small molecule of PI4KIIα, inhibits the growth of breast cancer cells。该研究发现了磷脂酰肌醇4位激酶II型α亚型（PI4KIIα）的第一个亚型特异小分子抑制剂PI-273，该抑制剂通过竞争其底物磷脂（PI）进而抑制酶活性，最终抑制乳腺癌肿瘤的生长。
PI4KIIα是磷脂酰肌醇信号通路和磷脂酰肌醇代谢中的关键分子，在PI（4,5）P2生物合成、溶酶体和高尔基体相关膜转运、细胞内信号通路传导、病原体吞噬和神经突触囊泡循环等方面起着重要作用。PI4KIIα的功能异常与肿瘤生长、痉挛性截瘫、高雪氏症和阿尔茨海默症等人类疾病密切相关。然而，PI4KIIα的基础研究和临床应用却因为缺少其特异性抑制剂受到限制。已发现的PIK家族抑制剂绝大多数是PI3K的ATP竞争性抑制剂。因为PIK家族各亚型激酶核酸结合口袋氨基酸序列的高度保守性，大多数ATP竞争抑制剂不具有亚型选择性抑制。
在前期系列工作基础上，生物物理所和上海药物所科研人员靶向 PI4KIIα 的 PI 变构位点，采用基于配体底物 PI 的药物设计策略，开展了 PI4KIIα 抑制剂的虚拟筛选。通过酶和细胞实验筛选，结合表面等离子共振实验和蛋白热稳定实验等生物物理实验，获得了 PI4KIIα 的首个抑制剂 PI-273，显著抑制 PI4KIIα 高表达的多种乳腺癌细胞系的细胞增殖。酶动力学研究表明，与其他绝大部分结合在激酶 ATP 位点的 PIK 激酶家族抑制剂不同，PI-273可逆竞争 PI4KIIα 底物 PI，从而抑制其酶活性。突变实验研究进一步证明了 PI4KIIα 的棕榈酰化插入片段是 PI-273 的关键作用位点。利用 CRISPR/Cas9 技术构建敲除 PI4KIIα 的细胞系，研究发现 PI-273 对敲除 PI4KIIα 的细胞系细胞增殖和 PI4KIIα 下游信号通路抑制作用显著降低，说明 PI4KIIα 是 PI-273 的特异性作用靶点。进一步机制研究表明，PI-273 可以通过阻碍细胞周期 G2/M 期而抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，抑制癌细胞成克隆能力。在小鼠移植瘤模型中，PI-273 可以显著的抑制 MCF-7 乳腺癌细胞诱导的小鼠肿瘤的生长，并对小鼠无明显毒副作用。
该研究有效整合了药物设计与实验验证，发现了 PI4KIIα 的第一个亚型特异小分子抑制剂。与绝大多数激酶的 ATP 竞争性抑制剂不同，由于 PI-273 是 PI4KIIα 变构位点底物PI的竞争性抑制剂，其具有更高的亚型选择性。该抑制剂的发现对 PI4KIIα 的基础科学研究和应用均具有重要的促进意义。
论文的共同通讯作者为陈畅和罗成，论文的共同第一作者为陈畅课题组博士李江美、博士研究生高振以及罗成课题组博士研究生赵丹。该研究工作得到中科院个性化药物先导专项（A类）、国家重点研发计划重大专项以及国家自然科学基金的资助。
来源：中国科学院生物物理研究所 中国科学院上海药物研究所
欢迎联系我们！[email protected]
