专栏名称: 生物学霸

「生物学霸」是丁香园旗下科研资讯平台。专门为科研人员打造，致力于让科研更简单更快乐。

到底谁还在做酶切连接？无缝克隆教你轻松构建复杂质粒（0 元试）

生物学霸 · 公众号 · 生物 · 2025-03-11 17:30

正文

师弟

这质粒构建太看运气了，从酶切到连接、转染，我处处小心，结果鉴定出来是个 假阳性克隆。

确实，酶切不完全，载体或目的基因残留的未切开片段会导致连接失败； 酶切温度，缓冲液成分 稍有偏差会改变酶识别位点的专一性从而产生错误的片段；即使成功连接转染，抽提鉴定出来发现不是想要的重组子，前期的努力也都付诸东流。

师兄

师弟

有没有一种 不需要酶切也能构建质粒载体 的基因组装技术呢？

你可以考虑 无缝克隆技术。 这是一种基于同源重组的基因组装技术，核心原理是通过三种酶的协同作用，在单管反应中实现 DNA 片段的快速连接， 无需限制性内切酶， 避免了传统克隆方法中繁琐的酶切和纯化步骤。最近 Gibson 无缝克隆在做 免费试用活动 ，你可以试试～

师兄

Gibson 无缝克隆， 不受片段序列限制，实现任意组装， 让您的载体构建快人一步，点击下方图片申请试用～

👇👇👇

试用详情：

1. 规格：10T；2. 运费：包邮 3. 提交试用申请后，将会在 7～14 个工作日与您联系

Gibson 无缝克隆原理

Gibson 无缝克隆由 Daniel G. Gibson 博士开发。通过 T5 核酸外切酶、高保真 DNA 聚合酶、耐热 DNA 连接酶三种酶的协同作用来实现 DNA 片段的重组连接。

T5 核酸外切酶：从 5’ 到 3’ 方向消化 DNA 片段，形成单链突出区域。

高保真 DNA 聚合酶：以单链 DNA 为模板，填补缺口，形成完整的双链 DNA。

耐热 DNA 连接酶：将 DNA 片段连接起来，形成无缝的 DNA 分子 112。

Gibson 无缝克隆的优势

使用简单：兼容 PCR 与酶切体系，省去繁琐的纯化步骤，显著缩短实验时间

超高效率：可稳定支持 5～6 个片段在同一克隆体系中组装，适用于复杂构建体的构建

推荐文章

生物学霸 · 颜宁任副主任，985，新增全国重点实验室

23 小时前

生物制品圈 · 涉嫌行贿→药企及原董事长被立案！

3 天前

生物学霸 · 「双一流」高校，院士+1

昨天

生物学霸 · 两会建议：支持这些院校进「双一流」

昨天

生物学霸 · 90 后中国药大女教授，完全由本土学府培养，科研成果频发

3 天前

闯先生 · 闯先生餐饮食品加速营项目筛选会即将火爆进行！

8 年前

山西有料 · 老母亲从七楼跳下！只因儿子说了一句....没流量也要看！

7 年前

有意思吧 · 亲爱的，我把它修好了！

7 年前

食品580 · 收藏 | 蔬菜及蔬菜制品标准汇编

7 年前

蔡礼旭老师 · 《幸福锦囊集》：教孩子与长辈相处的礼仪，称尊长，勿呼名

7 年前