看见 TCR

闲谈Immunology · 公众号 · · 2024-09-25 08:16

正文

TCR是T细胞免疫的核心成员。“眼见为实”，看见TCR很重要...

技术	优势	劣势	应用场景
扫描电镜	超高分辨率（可达1nm）	要求牢固固定	T细胞微绒毛的可视化
透射电镜	截面超高分辨率（可达0.1nm）	要求牢固固定和薄切片	TCR纳米团簇的可视化；微绒毛中细胞骨架丝的可视化
共聚焦显微镜	荧光团的高对比度成像（横向250nm分辨率，轴向500nm）	一次成像一个小面积，衍射受限，轴向分辨率差	细胞或大的超分子结构的成像，如免疫突触
全内反射荧光显微镜	有限的成像深度增加了对比度；可以与超分辨率技术相结合	要求表面贴装样品；靠近玻璃的荧光团的潜在成像偏差	基底细胞膜的成像，包括人工突触；对固定的和活的T细胞中的单个分子进行成像
光片荧光显微镜	有限的成像切面增加了轴向分辨率；可与超分辨率技术相结合；被成像的平面可以在z方向上移动	目前还不广泛使用；样品准备和客户定制的显微镜是限制因素	活T细胞和固定T细胞的膜蛋白和胞质蛋白的全细胞三维超分辨率成像和四维跟踪
结构化照明显微镜	超分辨率法（100 nm分辨率）；大的采集面积，提高三维分辨率	仅两倍分辨率的衍射限制技术；高度的光漂白（厚样品单处理不理想）	观察静息T细胞TCR的分布和激活后TCR的运动
受激辐射损耗显微镜	超分辨率方法(20 nm分辨率）；适用于实时和三维成像	高度的光漂白；荧光团的选择有限	观察静息T细胞TCR的分布和激活后TCR的运动
双螺旋点扩散函数显微镜	超分辨率方法(20 nm分辨率）；适用于实时和三维成像(20 nm轴向分辨率）；单分子跟踪	扩展的PSF需要低密度标记/表达	可视化TCR在T细胞激活不同阶段的分布，TCR在膜内的动态跟踪
光活化定位显微镜（PALM），随机光学重建显微镜（STORM）	超分辨率单分子定位方法(20 nm分辨率）；单分子跟踪（PALM）	长时间的采集和处理时间；荧光团选择有限（特别是PALM）；难以应用于活细胞	观察静止T细胞中TCR与微绒毛的分布和激活后的TCR动态
DNA-PAINT技术