来源 | NIRO（ID：NIRO-keyanmiao）
编辑 | 澹泊研究僧
牛血清白蛋白
(
BSA
)
是牛血清中的一种球蛋白，由多个氨基酸残基组成(有说法称包含607个，也有说法为583个)，其分子量约为66.4 KDa(具体数值可能略有差异，如66.446 KDa或66.430 KDa)，等电点为4.7。
作为一种蛋白质，BSA具有多种生物活性，包括携带金属离子、脂肪酸等，同时它自身也是激素类蛋白的一种。
BSA在Western blot实验中有什么作用吗？
(1) 保护酶的活性:
在WB实验中，加入B
SA可以提高溶液中蛋白质的浓度，从而对酶起到保护作用，防止酶的分解和非特异性吸附。
(2) 减轻酶的变性:
BSA还能减轻某些酶的变性，特别是那些可能因加热、表面张力及化学因素等不利环境因素引起的变性。
(3) 作为阻断剂:
在WB实验中，BSA还可以作为阻断剂使用，有助于减少非特异性结合，提高实验的特异性和灵敏度。
通过了解BSA在Western blot实验中的作用后，我们来聊聊为什么BSA不能震荡涡旋溶解吧！
在Western blot实验中，BSA常用作封闭液，与脱脂奶粉不同，BSA不能通过涡旋震荡溶解。为什么呢？
首先，涡旋搅拌产生的强烈剪切力和冲击力可能会扰动蛋白质的高级结构，导致蛋白质变性。
尤其是在温度升高的情况下，这种扰动可能更为显著，使得BSA分子间形成不可逆的β折叠结构，进而引发蛋白质聚集。
其次，震荡过程中溶液中可能产生气泡，这些气泡的破裂会引入氧气，使蛋白质处于氧化环境中，蛋白质中的半胱氨酸等氨基酸残基在氧化环境中容易被氧化，从而影响蛋白质的活性。
最后，
涡旋震荡还可能导致溶液中的BSA分布
不均匀
，形成局部溶度过高或过低的现象
，这会影响后续实验的准确性和可靠性。
相反，在实验中配制5%脱脂牛奶封闭液可以进行震荡而不会引起蛋白质变性，主要原因在于脱脂牛奶的成分和性质与BSA等纯蛋白不同。
脱脂牛奶中含有多种蛋白质(如: 酪蛋白和乳清蛋白)，而不仅是单一的蛋白质。这种混合组成的脱脂牛奶在震荡过程中更具有稳定性，能够抵抗机械搅拌带来的结构损伤。同时，脱脂牛奶在一定程度上会变现出乳化特性，这有助于分散和稳定混合物。
1. 理论上:
将BSA缓慢加入到预冷的适当缓冲溶液中，比如沿侧壁打入，
温和
轻轻摇动容器，以帮助BSA均匀溶解，
溶液在室温下静置一段时间，
避免过高的浓度，因为高浓度的BSA更难溶解，如果需要高浓度BSA溶液，可能需要长时间轻轻搅拌。
2. 实际上:
配置5%的BSA: 2.5g BSA放入EP管中，缓慢加入50mL缓冲液，放入4℃冰箱过夜，第二天就溶解了！
所以说，在溶解BSA时，建议采用更为温和的方式，如轻轻摇动容器或使用磁力搅拌器等。同时，为了确保BSA的充分溶解，还可以将其置于适当的温度(如4℃)下过夜溶解。这样不仅可以避免对蛋白质结构的破坏，还可以确保实验的准确性和可靠性。
[1] Chodankar, S., et al. "Structural evolution during protein denaturation as induced by different methods."
Physical Review E—Statistical, Nonlinear, and Soft Matter Physics
77.3 (2008): 031901.
[2] Lu, Rui, et al. "Probing the secondary structure of bovine serum albumin during heat-induced denaturation using mid-infrared fiberoptic sensors."
Analyst
140.3 (2015): 765-770.
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