WB、ELISA、IHC 各有利弊，怎么选？

丁香学术 · 公众号 · · 2022-07-29 17:27

正文

免疫组化、Western、ELISA，免疫学三大工具，分别用于定位，定性和定量。 以下内容来自「WB、ELISA、IHC 」三大专题，提前订阅收藏，每周更新。

IHC 免疫组化

Immunohistochemistry

是融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等)。

定位：通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织、细胞内抗原进行定位、 定性及定量的研究，主要是定位。

样品：细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。

ELISA 酶联免疫吸附试验

Enzyme linked immunosorbent assay

用到了免疫学原理和化学反应显色。可以用做精准定量。

样品：多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别。

操作上：需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是「吸附」的含义。

WB 蛋白质印迹

Western Blot

先要进行 SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。

样品：细胞、蛋白。

3 类实验区别与 选择

01-定位是免疫组化最大的优势

该方法可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究。

相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定位较直接准确、定性灵敏度高，是定位检测分析首选方法对病理学领域开展深入研究是十分有意义，尤其对于有些因子的转位研究十分有用。

02-WB 与 IHC 相比定量更加准确

当然WB也可定性和定位(通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反映它们的定位)，但敏感性远远低于IHC。

03-ELISA 最准确，是分泌性蛋白检测首选方法之一

尤其对于微定量分析多个样本非常有用，所用试剂和样品量很少，结果精确。