Cobas®liat system,Liat系统(Laboratory-in-a-tube,管中实验室)是一种新颖的生物样品检测平台。是由IQuum公司主导研发的分子POCT产品。2014年8月6日,IQuum公司被Roche集团以4.5亿美元收购。这次收购标志着罗氏正式进军分子诊断领域的POCT(Point-of-Care Testing)细分市场。Cobas Liat采用了新颖的PCR控温方式,利用固定的两个温度区域,使液体在这些温度区域内来回流动,从而实现PCR的温度循环,达到快速诊断的目的,特别是呼吸道感染检测只需20分钟出结果。1. cobas®Liat®分析仪
Cobas® Liat分析仪是一种自动化的核酸检测仪器,与Cobas® Liat试剂管共同组成Cobas® Liat系统。该仪器能够执行试剂准备、靶标富集、抑制物去除、核酸提取、聚合酶链反应(PCR)扩增、实时检测和结果解释等一系列操作。这使得核酸检测过程更加自动化,快速而准确地获得结果。值得关注的是Cobas®
Liat分析仪十分小巧、轻便,适用临床、实验室以及室外场所。从样本到检测也同样做到了简便快速,只需三步操作、15~20min就能得到样本的检测结果。
2. Cobas®测试管
目前罗氏诊断公布cobas®
Liat试剂管为5种:SARS-CoV-2、SARS-CoV-2 & Influenza A/B、Strep A、Influenza A/B & RSV、C. Difficile。2.1 Cobas®SARS-CoV-2
样本名称:新型冠状病毒;样本类型:鼻咽拭子;性能表现如下:
2.2 Cobas®SARS-CoV-2 & Influenza A/B)
样本名称:新型冠状病毒&甲型流感病毒、乙型流感病毒;样本类型:鼻咽拭子;性能表现如下:
2.3 Cobas®liat Strep A
样本名称:甲类链球菌;样本类型:咽拭子;性能表现如下:
2.4 Cobas®Influenza A/B & RSV
样本名称:甲型流感病毒、乙型流感病毒&呼吸道合孢病毒;样本类型:口鼻咽拭子;性能表现如下:
2.5 Cobas®liat C. Difficile
样本名称:艰难梭菌;样本类型:粪便;性能表现如下:
3. Cobas®测试管解析
3.1 Cobas®测试管-试剂部分
Cobas®测试管试剂主要由稀释液、内部质控、核酸提取相关试剂、UNG酶、PCR试剂组成,具体分布如下:
3.2 Cobas®测试管-结构部分
Cobas®测试管主要由柔性细管(10)、罩帽(20)、管构架(50)、套筒(90)组成。其中柔性细管(10)被制成多个截段,这些截段分别作为各个试剂组分的腔室。值得注意的是,为确保了腔室的密封性以及能够支撑试剂长期保存的特性,柔性材料选用的是耐高温,且生物相容性较好的材料。设计者通过热压,用封口(14)将腔室与腔室相互隔离,封口的宽度为1mm最优。
3.3 Cobas®测试管-流体情况
主要分为4个阶段分别为:样本预处理、试剂复溶、核酸提取、核酸扩增。3.3.1 样本预处理
面对复杂样本如血液样本、组织样本的预处理,Cobas®测试管主要通过两种方案进行解决:研磨、过滤。3.3.1.1 研磨
通过挤压并向固定方向进行研磨运动,达到对组织样本或其他复杂样本的处理。
3.3.1.2 过滤
血液样本通过滤膜(206)将红细胞(202)与待测白细胞(208)进行分离。3.3.2 试剂复溶
首先将打开夹具(310),其他夹具关闭。致动器(312)进行挤压,将多余的样本排入废液腔室(22),保留一定体积样本进入后续提取。其次,致动器(322)进行挤压,使得蛋白酶K (222) 与复溶缓冲(221)进行混合。然后,打开夹具(320),并让致动器(312和322)交替挤压,起到样本与蛋白酶K
MIX混匀的效果。之后,关闭致动器(312)与夹具(320)。最后,打开夹具(330),并让致动器(332和322)交替挤压,使得样本MIX与裂解液混合。3.3.3核酸提取
与试剂复溶相同,Cobas®测试管通过夹具与致动器,完成液体在装置内的流动,其中致动器(332)带有磁性,通过磁珠进行对样本核酸的提取。同理,磁珠吸附后,对磁珠进行清洗并洗脱。3.3.4 核酸扩增及检测
提取后的核酸样本进入含UNG酶腔室(180)在37℃条件下混合5min,消除PCR污染产物。反应完成后,温度升至95℃,将体系内的UNG进行灭活。然后,反应液进入反应腔室2(290),其中将其腔室加热至60 ℃。最后通过交替挤压致动器(392和382),使得反应液进行温度循环,从而达到扩增目的。并通过荧光检测器(492)进行荧光信号采集。