液相色谱方法优化——色谱柱的优化

色谱 · 公众号 · · 2024-06-19 20:07

正文

液相方法优化中的色谱柱的优化就是色谱柱的选型。选型的原则无非就是根据分析物的性质、流动相的条件、初步分离的结果等来选择合适的色谱柱。

强极性样品

对于强极性的样品，C18色谱柱保留弱，可以选择碳含量更高的C18；或者选用亲水的AQ C18，用纯水相洗脱，会增强保留；再或者选用HILIC模式色谱柱。

弱极性样品

对于弱极性的样品，C18色谱柱保留很强或常规有机相洗脱不下来，可以尝试碳含量更低的色谱柱，或者苯己基，C8，C4等。

易污染样品

对于中药类或生物类样品，色谱柱容易被污染，可以尝试大孔径填料色谱柱更耐污染；

在分离度要求不高的前提下，也可以用粒径更大的色谱柱，柱压较低，随着污染柱压升高的空间比较大；

对于分离要求高，且容易柱压高的分离项目，可以尝试粒径更大的实心核填料的色谱柱，柱效与小粒径填料的色谱柱相当，柱压更低。

对于易污染色谱柱的样品，可以的话尽量多做一些样品前处理工作。

大分子样品

对于大分子的分析物，尤其是空间结构大，比如多肽、蛋白、核酸，聚合物等，选用大孔径填料的色谱柱。

样品pKa

我们通常根据分析物的pKa来选择流动相的pH，如果分析物pKa小于7，那么流动相pH应选择低于pKa-2，如果pKa大于7，那么流动相pH应选择高于pKa+2，但常规的硅胶基质色谱柱耐受pH范围为2-6，我们就根据流动相的pH来选择可耐受相应pH的色谱柱。